转化生长因子—β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3和Smad7 mRNA表达的调控机制

目的 研究转化生长因子—β1(TGF—β1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3，7mRNA表达的调控机制。方法 用放线菌酮(CHX)种放线菌素D预处理KFB，以分别阻断KFB内源性蛋白质的合成及mRNA合成。采用逆转录PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3，7mRNA表达水平。结果 经CHX预处理后，KFB的Smad3 mRNA表达轻度上调，并完全抑制了TGF—β1对KFB Smad3 mRNA的下调作用，而CHX预处理对KFB的Smad7 mRNA表达及TGF—β1上调Smad7 mRNA的作压并无明显影响。经放线菌素D预处理后，随TGF—β1作用时间延长，KFB的Smad3 mRNA表达水平无明显下降。结论 TGF—β1对KFB Smad3 mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与；但对Smad7 mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与，KFB细胞中的Smad7可能也是活化的Smads的直接靶基因。     

LncRNA XIST在子宫内膜癌组织中的表达及其靶向microRNA-101-3p对癌细胞生物行为学的影响

目的 探究lncRNA XIST在子宫内膜癌组织中的表达及其靶向microRNA-101-3p（miR-101-3p）对癌细胞生物行为学的影响。方法 选取2019年7月—2021年7月南通市妇幼保健院82例手术切除且经术后病理确诊的子宫内膜癌患者的癌组织及癌旁正常子宫内膜组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测子宫内膜组织lncRNA XIST、miR-101-3p mRNA的相对表达量;比较不同因素间lncRNA XIST、miR-101-3p mRNA的差异;取Ishikawa细胞随机分为对照组（C组）、空质粒组（NC组）、lncRNA XIST表达抑制组（sh-XIST组）,其中NC组和sh-XIST组分别转染空载质粒与plko-lncRNA XIST-shRNA,C组不进行任何处理;CCK-8法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因观察lncRNA XIST与miR-101-3p的靶向性。结果 子宫内膜癌组织中lncRNA XIST mRNA相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）,miR-101-3p mRNA相对表达量低于癌旁组织（P <0.05）。不同TNM分期和淋巴结是否转移患者的lncRNA XIST、miR-101-3p mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。C组、NC组、sh-XIST组在不同时间点Ishikawa细胞增殖活性的比较采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的Ishikawa细胞增殖活性有差异（P <0.05）;②3组的Ishikawa细胞增殖活性有差异（P <0.05）;③3组的Ishikawa细胞增殖活性变化趋势有差异（P <0.05）。sh-XIST组细胞迁移率低于C组和NC组（P <0.05）。sh-XIST组侵袭个数少于C组和NC组（P <0.05）。双荧光素酶报告基因显示,lncRNA XIST可以靶向作用于miR-101-3p。结论 lncRNA XIST和miR-101-3p mRNA在子宫内膜癌组织中异常高表达,并且在不同TNM分期及是否淋巴结转移患者子宫内膜癌组织中的表达有差异。抑制Ishikawa细胞中lncRNA XIST的表达可以抑制癌细胞的恶性细胞生物学行为,其机制可能与靶向调控miR-101-3p有关。     

三款mRNA疫苗制备工艺技术分析

与传统的灭活疫苗相比,mRNA疫苗免疫原性强,可同时激活体液免疫和细胞免疫,另外还具有开发周期短、广谱性、成本低和可大规模快速量产等优势,可有效应对突发性、变异快以及大规模的疫情。作为一种新的疫苗开发路径,mRNA疫苗在技术工艺上有很多新的特色和挑战。该研究以Pfizer/BioNTech公司的mRNA疫苗BNT162b2、Moderna公司的mRNA-1273,以及国内多家单位联合开发的ARCoV这3款新型冠状病毒疫苗为例,从抗原选择、核苷修饰及脂质体纳米颗粒(LNP)制剂制备等方面,对mRNA疫苗的开发设计和制备工艺进行了梳理分析,并讨论了当前面临的挑战和未来的发展方向,旨在为mRNA疫苗技术的开发和应用提供参考。     

m6A识别蛋白HuR调控lncRNA TRG-AS1抑制结直肠癌生长的机制研究

目的 探讨N6-甲基腺苷（m6A）识别蛋白人类抗原R(HuR)调控长链非编码RNA T细胞受体γ位点反义RNA 1(lncRNA TRG-AS1)对结直肠癌（CRC）生长的影响。方法 比色法检测CRC患者的癌组织、癌旁组织及正常结肠上皮细胞NCM460及CRC细胞HCT116、SW480、LOVO中m6A含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测TRG-AS1表达;Western blot检测HuR蛋白表达。将HCT116细胞分为Ct组、OE-NC组、OE-HuR组、si-NC组、si-HuR组、siHuR+pcDNA组、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1组,CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;裸鼠体内移植瘤实验观察肿瘤生长情况;采用甲基化RNA免疫共沉淀（MeRIP）检测TRG-AS1上是否存在m6A位点;RNA pull-down实验和RNA免疫共沉淀（RIP）检测TRG-AS1与HuR蛋白的相互作用。结果 在CRC组织和细胞中,HuR蛋白、TRG-AS1高表达,m6A含...     

多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法的建立及验证

目的 建立多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法并进行验证。方法 以不同新型冠状病毒变异株mRNA为靶基因,选取各自保守序列设计引物和探针,建立多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法,并进行了线性范围、重复性、准确度、中间精密度、耐用性和适用性等方法学验证。结果 mRNA浓度在1～150 pg·mL^-1内时线性良好;重复性变异系数(coefficient of variation,CV)<10%;准确度回收率84%～114%,CV<10%;中间精密度和耐用性CV均<5%;并且4种不同二价新型冠状病毒mRNA疫苗组份比例检测结果CV均≤5%。结论 建立的多价新型冠状病毒变异株mRNA疫苗组分比例ddPCR检测方法灵敏度高,稳定性好,特异性强,适用于多价新型冠状病毒mRNA疫苗进行组分比例和含量检测。     

长链非编码RNA赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA(LOXL1-AS1)在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响和可能的作用机制。方法 选取2016年1月至2018年12月在河南省人民医院行结直肠癌根治术的56例病人新鲜癌组织,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织样本及结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116和Lovo细胞中lncRNA LOXL1-AS1的表达水平,以配对癌旁组织及人正常结直肠黏膜细胞FHC作正常对照;构建靶向LOXL1-AS1序列的小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)并转染SW480和Lovo细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法检测沉默lncRNA LOXL1-AS1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测沉默LOXL1-AS1表达后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果 LOXL1-AS1在结直肠癌...     

反义翻译延伸因子TEF-1δ对氯化镉致癌性的逆转作用

背景与目的：翻译延伸因子TEF-1δ(基因文库新添编号为AF304351)是一个新发现的镉应答原癌基因。本研究之目的在于探讨反义TEF-1δ能否逆转镉转化细胞的致癌性。材料与方法：用磷酸钙介导转染法和G418细胞筛选技术,建立CdCl2转化BALB／c-3T3细胞反义TEF-1δ稳定表达系统,再用软琼脂检测和裸鼠致瘤试验对这些转基因细胞的致癌性逆转情况进行鉴定。结果：CdCl2转化BALB／c-3T3细胞中反义TEF-1δ表达可逆转这些细胞的转化表型,与非转染细胞和载体转染对照细胞比较,转染反义TEF-1δ的镉转化细胞在软琼脂上所形成的锚非依赖性生长集落减少29％～44％。转染反义TEF-1δ基因的镉转化细胞可延迟裸鼠出现肿瘤的时间,而且这些肿瘤的大小显著变小,肿瘤重量平均下降54％～58％。结论：反义TEF-1δ mRNA表达可逆转镉转化细胞的致癌性;应用反义TEF-1δ阻断TEF-1δ癌基因表达对镉诱发的肿瘤可能有治疗价值。     

应用RT—PCRIS技术检测大肠肿瘤石蜡标本三区组织中P~(53)mRNA

对9例大肠癌和3例良性大肠肿瘤石蜡标本的肿瘤灶、移行区和自身正常肠组织,应用反转录原位PCR技术进行了研究。结果表明,在肿瘤早期即可能出现P~(53)基因mRNA改变,应用RT-PCRIS检出P~(53)mRNA的阳性率高于常规免疫组化法。RT-PCRIS具有很高的灵敏度和特异性,且可与组织结构联系进行分析,具有十分诱人的前景。     

长链非编码RNA同源盒基因A11反义RNA在急性淋巴细胞白血病患儿骨髓中的表达及意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿骨髓中的表达及意义.方法 选取108例初治ALL患儿及57例非肿瘤性疾病患儿,比较ALL患儿与非肿瘤性疾病患儿、不同ALL病理类型、治疗后不同疗效ALL患儿HOXA11-AS的相对表达量.实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测108例不同临床特征ALL患儿骨髓中HOXA11-AS的相对表达量.结果 108例初治ALL患儿骨髓HOXA11-AS的相对表达量明显高于非肿瘤性疾病患儿(P﹤0.01),其中,B-ALL型初治ALL患儿骨髓HOXA11-AS的相对表达量明显低于T-ALL型患儿(P﹤0.01).108例初治ALL患儿经2个周期的化疗后完全缓解46例,未完全缓解62例,完全缓解患儿HOXA11-AS的相对表达量明显低于未完全缓解和初治ALL患儿(P﹤0.01).BCR/ABL融合基因阳性表达初治ALL患儿骨髓HOXA11-AS的相对表达量,明显高于BCR/ABL融合基因阴性表达患儿(P﹤0.05).结论 HOXA11-AS在ALL患儿中表达上调,并与ALL分型有关,其可能参与ALL的发生发展过程.